El azul de toluidina es un colorante que se usa para tinciones rápidas en histología vegetal. Es muy fácil de preparar y el tiempo de tinción es muy corto. Además, produce una reacción metacromática, es decir, es capaz de dar color diferente a diferentes estructuras. El color va desde verde brillante hasta púrpura, pasando por una gama de azules.
Las tinciones generales para tejidos vegetales se usan habitualmente en los laboratorios de histología para ver la calidad de las muestras de tejido y de las estructuras que contienen. Aunque en el caso de la tinción con azul de toluidina se usa un solo colorante, otras tinciones generales combinan más de uno, como la tinción de safranina y azul alcián.
Procedimiento
Partimos de muestras que que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
2.- 2x10 min en etanol 100º
3.- 10 min en etanol 96º
4.- 10 min en etanol 80º
5.- 10 min en etanol 50º
6.- 5 min en H2O destilada
7.- 30 s en azul de toluidina 0,5 % en H2O destilada
8.- 3x10 s en H2O destilada con agitación
9.- 10 s en etanol 96º con agitación
10.- 2 x 10 s en etanol 100º con agitación
11.- 2 min + 5 min en xileno
12.- Montado con medio de montaje
Resultados
Paredes celulares primarias delgadas: azul a púrpura.
Paredes celulares secundarias: verde brillante.
Cutícula madura: verde brillante.
Consejos
Quizá lo más destacable de esta tinción es la rapidez con se hacen los pasos que van tras el colorante y hasta el segundo paso de xileno. El tiempo en el colorante y los segundos en cada uno de los pasos posteriores determinarán la intensidad de la tinción. Es conveniente procesar los portaobjetos uno a uno, puesto que hay que agitarlo lentamente con la mano como si se estuviera removiendo un líquido con una cucharilla en la que el portaobjetos hace de cuchara, o sumergiendo y sacando el portaobjetos de la solución.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Azul de toluidina al 0.5 % en H2O destilada
H2O destilada
Medio de montaje
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Cubreobjetos
