El naranja de acridina es un colorante orgánico catiónico fluorescente metacromático que se utiliza para la tinción de ácidos nucleicos y compartimentos ácidos como los lisosomas. Emite luz verdosa cuando tiñe al ADN y luz más anaranjada cuando se une a ARN o tiñe compartimentos ácidos.
Procedimiento
Protocolo modificado por Zaira Salgueiro
Partimos de muestras que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y se han adherido a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1. 2x10 min en xileno para desparafinar
2. 2x10 min en etanol 100º
3. 10 min en etanol 96º
4. 10 min en etanol 80º
5. 10 min en etanol 50º
6. 5 min en H2O destilada
7. 10-20 s en naranja de acridina
Preparación de la solución de naranaja de acridina:
Naranja de acridina (CAS: 494-32-8) 26 mg
Ácido acético 2 ml
H2O destilada 98 ml
8. 1 min en alcohol salino
Preparación de alcohol salino:
NaCl 0,9 g
Etanol 100º 2 ml
H2O destilada 98 ml
9. 1 min en solución salina
Preparación de solución salina:
NaCl 0,9 g
H2O destilada 100 ml
17. Montado con una gota de glicerol y un cubreobjetos.
18. Observar con el microscopio de fluorescencia
Resultados
Núcleos: verde brillante.
Compartimentos ácidos: anaranjado-amarillento.
Consejos
Los pasos por alcohol salino y solución salina son esenciales para establecer la calidad e intensidad de la tinción.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 96º y 100º
Naranja de acridina (CAS: 494-32-8)
NaCl
Ácido acético
H2O destilada
Glicerol
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Cubreobjetos
