Esta tinción se usa para teñir la mielina del sistema nervioso central, aunque no sirve para la del sistema nervioso periférico. Es útil en estudios de alteraciones de los tractos nerviosos o del tejido nervioso en general. También se emplea en casos de muerte celular puesto que las neuronas degeneradas aparecen completamente negras, mientas que en las sanas sólo se tiñe el núcleo.
Procedimiento
Partimos de muestras que que han sido fijadas en formol o Bouin e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1. 2x10 min en xileno para desparafinar
2. 2x10 min en etanol 100º
3. 10 min en etanol 96º
4. 10 min en etanol 80º
5. 10 min en etanol 50º
6. 5 min en H2O destilada.
7. 16-18 h en solución de sulfato férrico amónico al 2.5 % en H2O destilada.
Solución de sulfato férrico amónico 2.5 g en 100 ml de H2O destilada. Hay que usar el mortero para triturar y disolver bien los cristales y asegurarse de que la solución tiene un color violáceo.
8. 1.5 a 2 h en solución de trabajo de hematoxilina.
(a) Hematoxilina alcohólica: 10 g de hematoxilina en 100 ml de etanol 100º.
(b) Solución saturada de carbonato de litio: 1.45 g de carbonato de litio en 99 ml de H2O destilada.
Solución de trabajo de hematoxilina: 45 ml de H2O destilada + 10 ml de (a) + 7 ml de (b).
Preparar la solución de trabajo de hematoxilina siguiendo el orden indicado. No agitar demasiado para mezclar los 3 componentes. Esta solución se puede usar durante una semana aproximadamente.
9. Etanol de 80º hasta aclarar el fondo. El tiempo de aclarado depende de la intensidad del color de la tinción.
10. 5 min en etanol 96º
11. 2x10 min en etanol 100º
12. 2x10 min en xileno
13. Montado con medio de montaje
Resultados
Glía y nucléolo: negros
Vainas de mielina: azul oscuro
Neuronas en degeneración: soma negro
Fondo: claro
Consejos
Es importante no sobreteñir con la hematoxilina puesto que se tendría una tinción de fondo muy oscura que oculta la mielina.
Los tiempos en los alcoholes puede variar para conseguir la tinción deseada, sobre todo el etanol de 80º tras la solución de trabajo de hematoxilina.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Hematoxilina (C.I. 75290)
Sulfato férrico amónico
Carbonato de litio
Medio de montaje
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Mortero
Cubreobjetos
