Los portaobjetos son el soporte de las secciones y ambos, secciones y portaobjetos, pasarán por todas las soluciones y tratamientos de la técnica, cualquiera que ésta sea. Por tanto, antes de usar los portaobjetos, procuraremos que estén lo más limpios posible. En caso contrario podría darse una mala adhesión de los cortes o aparecer artefactos durante la técnica, tales como tinciones de fondo o precipitados causados por suciedad o por restos de materia orgánica que contengan dichos portaobjetos.
Normalmente los portaobjetos nuevos no necesitan tratamientos previos antes de ser usados, aunque hay que asegurarse de su limpieza. Los que tengan restos de suciedad o aquellos que sean reciclados de otras técnicas han de limpiarse. Procedimientos sencillos para conseguir portaobjetos limpios, y en general cualquier material de vidrio de laboratorio, son los siguientes:
Procedimiento
a) Tratamiento suave
1) Sumergir los portaobjetos en etanol, acetona, o una mezcla de etanol-éter, durante más de 15 minutos.
2) Antes de usar, sacar los portaobjetos de la solución alcohólica y dejarlos secar al aire en un lugar libre de polvo y seco.
3) Una vez secos los portaobjetos se pueden usar o almacenar en cajas protegidas del polvo y la humedad.
b) Tratamiento medio
1) Lavar los portaobjetos con agua y jabón o lavavajillas.
2) Aclarar en agua hasta que no haya restos de jabón.
3) Sumergir en ácido acético durante 15 minutos.
4) Enjuagar en agua destilada al menos 10 veces.
5) Comprobar que el pH final está próximo a 6-7, si no es así, seguir lavando.
6) Secar los portaobjetos en una estufa a 60 ºC toda la noche.
7) Almacenar los portaobjetos en una caja libre de polvo y humedad hasta su uso.
c) Tratamiento agresivo (mezcla sulfo-crómica)
1) Preparar la mezcla sulfo-crómica. (1 parte de dicromato potásico, 2 partes de ácido sulfúrico, 7 partes de agua destilada)
2) Sumergir los portaobjetos al menos durante 24 horas.
3) Enjuagar los portaobjetos repetidas veces con agua destilada.
4) Dejar secar y usar, o almacenar en una caja seca y sin polvo.
Consejos
Los portaobjetos comerciales suelen venir suficientemente limpios y desengrasados para usarlos directamente. Una limpieza suave es suficiente. El criterio para asegurarse de su limpieza es que se mojen uniformemente en toda su superficie con agua destilada. La grasa y otros contaminantes impiden esta uniformidad.
Limpiar los portaobjetos los más rápido posible tras su uso para evitar que las sustancias se desequen sobre el cristal y sean mucho más difícil de eliminar. Si no es posible la limpieza inmediata, maneter los portaobjetos en agua hasta su procesamiento.
Hay que evitar portaobjetos con las superficies dañadas o rayadas. Estas rayaduras se pueden evitar usando instrumentos de manipulación de madera o pinceles durante la técnica histológica y esponjas suaves para eliminar los restos sólidos de la superficie de los portaobjetos durante el proceso de lavado.
Si lo que se quiere reciclar son portaobjetos montados con medio de montaje y cubreobjetos, entonces hay que hacer un paso previo en xileno (puede ser xileno reciclado) durante toda la noche o varios días. De esta manera se disuelve el medio de montaje y se puede desprender el cubreobjetos.
No es buena idea que los ácidos entre en contacto con el portaobjetos antes de haber eliminado meticulosamente todo el jabón o detergente de su superficie. De otra manera se puede formar una fina película de grasa.
La grasa de los portaobjetos se elimina bien mediante la ebullición en una solución débil de carbonato sódico.
Es importante que el aclarado elimine cualquier resto de detergente o agente usado en la limpieza puesto que podría interferir en las técnicas posteriores. Este alclarado se puede hacer con agua corriente o, si es necesario con agua destilada.
En el tratamiento con mezcla sulfo-crómica, la preparación de la mezcla se ha de hacer en campana de extracción de gases y preferiblemente en una bandeja con hielo, puesto que la reacción es exotérmica. Una vez terminado el tratamiento la mezcla se guarda en un recipiente de cristal bien cerrado para usos posteriores. El dicromato es muy corrosivo y cancerígeno.
En el tratamiento con mezcla sulfo-crómica, la mezcla se puede usar siempre que conserve el color rojizo, y desecharla cuando adquiera un color verdoso.
En el tratamiento con mezcla sulfo-crómica no desechar la solución por el fregadero. Hay que inactivarla químicamente.
Productos
a) Tratamiento suave
Etanol, acetona, éter
Agua destilada
b) Tratamiento medio
Jabón, lavavajillas
Ácido acético
Agua destilada
c) Tratamiento agresivo
Dicromático potásico
ácido sulfúrico
Agua destilada
Material
Portaobjetos
Recipientes de vidrio herméticos
Cestillas de vidrio para portaobjetos
Cubetas de vidrio
Estufa a 60 ºC
Campana extractora de gases
Caja para almacenar portaobjetos
