Esta impregnación argéntica se utiliza para poner de manifiesto a las fibras reticulares, las cuales son fácilmente observables en los tejidos linfoides y en la médula ósea.
Procedimiento
Partimos de muestras que han sido fijadas e incluidas en parafina. Estas muestras se han cortado en secciones de unas 8 µm de grosor y adheridas a portaobjetos recubiertos con gelatina-alumbre.
1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
2.- 2x10 min en etanol 100º
3.- 10 min en etanol 96º
4.- 10 min en etanol 80º
5.- 10 min en etanol 50º
6.- 5 min en H2O destilada
7.- 1-2 min de oxidación en permanganato potásico al 1 % en H2O destilada
8.- Varios lavados en H2O destilada.
9.- 1 min de blanqueo en metabisulfito potásico al 3 % en H2O destilada
10.- 5 min de lavado con agua corriente abundante
11.- 1 min en solución de alumbre férrico al 2 % en H2O destilada (solución recién preparada).
12.- 10 min de lavados con agua corriente.
13.- 2 x 2 min lavados en H2O destilada.
14.- 1 min de incubación en el complejo argéntico (solución recién preparada).
El complejo argéntico está formado por plata amoniacal diluida 1:1 en H2O destilada. Preparación: 10 ml de solución de nitrato de plata al 10%, 2 ml de hidróxido de potasio al 10 %. Se forma un precipitado que se disuelve con amoniaco concentrado. Tras tener la solución clara se añade más nitrato de plata hasta que empiece a haber precipitado de nuevo. Entonces preparar el complejo argéntico.
15.- 10 s de lavado con agua destilada (sacar y meter las secciones)
16.- Reducir con formol (formaldehído al 10 %) Deterner la reducción mediante observación.
17.- 5 min de lavado en agua corriente.
18.- 1 min en metabisulfito potásico al 1 %.
19.- 1 min en tiosulfato sódico al 1 %.
20.- 5 min de lavado en agua corriente.
21.- 1 min en H2O destilada.
22.- 5 min en etanol 50º
23.- 5 min en etanol 70º
24.- 5 min en etanol 80º
25.- 5 min en etanol 96º
26.- 2x5 min en etanol 100º
27.- 2x5 min en xileno
28.- Montar con medio de montaje.
Resultados
Fibras reticulares: negras.
Colágeno: amarillento.
Consejos
Uno de los pasos críticos para tener una buena coloración es el tiempo de reducción con formol, el cual debe determinarse empíricamente.
Es también importante que el paso previo a la reducción sea muy rápido.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 96º y 100º
Permanganto potaśico al 0.5 %
Metabisulfito potásico al 3 % y al 1 %
Alumbre de hierro al 2 %
Nitrato de plata al 10%
Hidróxido potásico al 10%
Amoniaco concentrado
Tiosulfato sódico al 1 %
H2O destilada
H2O corriente
Medio de montaje
Material
Probetas, frascos y botellas
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Cubreobjetos
