La tinción con rojo picrosirio (colorante Sirius Red + ácido pícrico) resalta las fibras de colágeno del tejido conectivo. Es muy útil para cuantificar y estudiar la orientación de la fibras de colágeno. Su utilidad es mayor cuando se puede utilizar luz polarizada, con la cual se produce birrefringencia que resalta más dichas fibras. La adción de ácido pícrico aumenta la especificidad de la tinción. La refringencia se debe a las moléculas de Sirius Red se alinean con las fibras de colágeno.
Procedimiento
Partimos de muestras que que han sido fijadas en paraformaldehído al 4% e incluidas en parafina mediante un procedimiento estándar. Las muestras se cortaron en secciones de unas 8 µm y se adhirieron a portaobjetos recubiertos con gelatina.
1.- 2x10 min en xileno para desparafinar
2.- 2x10 min en etanol 100º
3.- 10 min en etanol 96º
4.- 10 min en etanol 80º
5.- 10 min en etanol 50º
6.- 5 min en H2O destilada
7.- 1h Solución de Rojo Picrosirio
Solución de Rojo Picrosirio: Picrosirius Red 0,1 % en ácido pícrico saturado en H2Od
En el caso de queramos teñir tejidos mineralizados, como el hueso, hay que realizar un proceso de desmineralización primero para que el proceso de corte se posible y fácil (ver aquí).
8.- 10 s en Ácido acético al 0,5 % en H2Od
9.- 3x15 min en etanol 100º
10.- 30 s en xileno
11.- 10 min en xileno
12.- Montado con medio de montaje
Resultados
Fibras de colágeno: rojo. Con luz polarizada: azul, verde, amarillento brillante
Resto del tejido con luz polarizada: oscuro.
Consejos
Esta tinción muy útil cuando se utiliza luz polarizada
Los distintos colorores de las fibras de colágeno no parecen indicar un tipo especial de colágeno fibroso (I, II, o III), sino la orientación y modo de empaquetamiento.
Para la matriz ósea es bueno utilizar un descalcificante suave que no degrade la matriz extracelular, tal como el EDTA, o ácidos suaves como el fórmico.
Productos
Xileno
Etanol de 50º, 70º, 80º, 90º, 96º y 100º
Picrorisius Red
Ácido acético
H2O destilada
Medio de montaje
Material
Cubetas de tinción
Cesta para portas
Cubreobjetos
